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酶标仪是如何从多方面进行自检的

点击次数:298次  发布时间:2020-06-04
酶标仪操作中如果需要自检,需要使用者从多个方面进行操作,其中包括:
1、外观:酶标仪上应有仪器名称,型号,编号,生产厂家,出厂日期和电源电压;各调节旋钮,按键和开关均能正常工作,外表面无明显机械损伤,显示文字应清楚完整。
2、稳定性:选用492nm波长,在吸光度o.0A处,测定标称值为1.0A的光谱中性滤光片(测定操作按仪器说明进行),记录仪器示值或均值,10min后再次记录仪器示值或均值,前后两次测定值之差不应超过±0.00。
3、吸光度测定的重复性:波长选择同(三),在酶标板*排加注空白溶液,第二排加入浓度为200rig/ml的重铬酸钾溶液,重复测定5次。记录每次测定的第二排吸光度值,取第二排任一孔吸光度值与各次对应孔吸光度值。
4、吸光度测定的准确度:选用405,492和620nm波长,以空气为参比,分别测定标称值为0.5和1.0A的光谱中性玻璃滤光片,用专用测试板代替酶标板,按仪器说明连续测定3次,按下式计算准确度:AA=1/3(A、+A。+A3)—A:(A:为标准值)。
5、线性选用:酶标仪的线性选用540nm波长,将标称值o.5,1.0A中性滤光片分别放入专用测试板样本位置中,以空气为参比,各重复测定3次;然后将以上两片中性滤光片叠加后置于专用测试板的同一孔位中,重复测定3次。
6、测定速度的检定:选用492nm波长,放人96孔酶标板进行测定,用秒表计测仪器打印出全部数据的时间。酶标仪除了在选购时,应尽可能自检外,在使用中也应定期检定,以保证酶标仪测定的有效性。附:200ttg/ml重铬酸钾溶液的配制将重铬酸钾固体试剂放人称量瓶中(去盖)置于烘箱中,在105±5℃下烘2h后,置于干燥器内冷却30min,在分析天平上准确称取o.2829g,置于100ml烧杯中,用o.05mol/L稀硫酸溶解后,移入500ml容量瓶中,以少量o.05mol/L稀硫酸洗烧杯3次,洗液并入容量瓶中,用0.05mol/L稀硫酸稀释刻度线,摇匀。
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光通过被检测物,前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量,特定波长下,同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。
检测单位用OD值表示, OD是optical density(光密度)的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度, OD=log(1/trans),其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则,OD值与光强度成下述关系:
E=OD=log(lo/Ι) 其中E表示被吸收的光密度, Ιo 为在检测物之前的光强度,Ι为从被检测物出来的光强度。
 
OD值由下述公式计算:
c为检测物的浓度 b为检测物的厚度 a为摩尔因子在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长,在此波长下,此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段,就会造成检测结果的不准确。因此,在测定检测物时,我们选择特定的波长进行检测,称为测量波长。但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收,为了消除这种非特异性吸收,我们再选取一个参照波长,以消除这个不准确性。在参照波长下,检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。
 
OD值由下述公式计算:
c为检测物的浓度 b为检测物的厚度 a为摩尔因子在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长,在此波长下,此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段,就会造成检测结果的不准确。因此,在测定检测物时,我们选择特定的波长进行检测,称为测量波长。但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收,为了消除这种非特异性吸收,我们再选取一个参照波长,以消除这个不准确性。在参照波长下,检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。
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