高压消毒灭菌锅是属于特种灭菌设备，因此在其使用过程中就更应该做到规范：
1、首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜，将需要灭菌的物品放入内层锅，盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。
2、加热使锅内产生蒸气，当压力表指针达到 0.5个大气帕时，打开排气阀，将冷空气排出，此时压力表指针下降，当指针下降至零时，即将排气阀关好。
3、继续加热，锅内蒸气增加，压力表指针又上升，当锅内压力增加到所需压力(121℃)时，将火力减小，按所灭菌物品的特点，使蒸气压力维持所需压力一定时间(15-20min)，然后将灭菌器断电，让其自然冷后再慢慢打开排气阀以排除余气，灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。
当高压消毒灭菌锅试验已完成，已灭菌物品从灭菌器中取出，应仔细检查放置，以免再次造成污染检查包装的完整性，若有破损不可作为无菌包使用手术包应干燥。用化学指示胶带贴封或其中放有化学指示卡的包，在灭菌后或无菌包使用前应检查是否达到灭菌的包泽或状态，如未达到不可作为无菌包使用。
对液体灭菌时，应将液体灌装在耐热的玻璃瓶中，以不超过3/4体积为好。要用玻璃纸和纱布包扎瓶口，如用橡皮塞的，应插入针头排汽，不要使用未打孔的橡胶和软木塞易燃和易爆物品如CHCl3、苯类等，禁用高压蒸汽灭菌法。
对于取出的包掉落在地或误放不洁之处或沾有水液，均应视为受到污染。且不可作为无菌物品使用已灭菌的物品，同时应标明灭菌日期，已灭菌的物品，不得与未消毒物品混放。每批灭菌处理完成后，应按流水号登册。记录灭菌物品包数量，灭菌温度，作用时间和灭菌日期，操作者签名。有温度，时间记录装置的，应将记录纸归档备案。
运送无菌物品的载具应每日清洗消毒并保持干燥，物品顺序摆放，防止污染，合格的无菌包应立即放无菌物品贮存室内，该室应可关闭并经过消毒清洁处理，专室，灭菌后的物品，应放在无菌区厨柜内(或架子上、推车内)。
